WB常用試劑使用可逆染色劑例如麗春紅S檢測(cè)轉(zhuǎn)膜效果，檢查轉(zhuǎn)膜操作是否正確。PVDF膜需預(yù)先浸在甲醇中，然后浸到轉(zhuǎn)移緩沖液中。代替5%脫脂奶粉，使用含0.5%脫脂奶粉或無(wú)脫脂奶粉的抗體稀釋液，或更換封閉劑，減少封閉時(shí)間。使用新鮮一抗，重復(fù)使用有效濃度會(huì)降低。在孵育和洗滌液中加入溫和去污劑如吐溫-20。脫脂奶粉含有酪蛋白，該蛋白本身就是一種磷酸化蛋白，會(huì)結(jié)合磷酸化特異性抗體而易產(chǎn)生高背景。使用BSA代替奶粉作為封閉劑。