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1. 金屬螯合填料
固定化金屬離子親和層析（Immobilized Metal Affinity Chromatography, IMAC）是一種廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)，特別是帶組氨酸標簽（His-tag）的重組蛋白純化的技術(shù)。其核心原理是利用蛋白質(zhì)表面的氨基酸殘基（主要是組氨酸）與固定在層析介質(zhì)上的過渡金屬離子（通常是鎳離子, Ni2?）之間的親和力進行選擇性分離。以下簡練介紹三種常見的IMAC層析介質(zhì)：Ni-IDA，Ni-NTA和Ni-TED。
特點 | Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF | Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF | Ni-TED瓊脂糖凝膠FF |
結(jié)構(gòu)與螯合 | IDA（Iminodiacetic acid）是一種三齒螯合劑，它通過三個位點（一個氮原子和兩個羧基氧原子）與鎳離子結(jié)合。這使得鎳離子上有三個剩余的配位點可與目標蛋白的組氨酸標簽結(jié)合 | NTA（Nitrilotriacetic acid）是一種四齒螯合劑，它用四個位點（一個氮原子和三個羧基氧原子）來固定鎳離子。這為目標蛋白的組氨酸標簽留下了兩個可用的結(jié)合位點 | TED（Tris(carboxymethyl)ethylenediamine）是一種五齒螯合劑，它通過五個位點牢固地螯合鎳離子，僅留下一個配位點與目標蛋白結(jié)合 |
親和力/結(jié)合載量 | 高 | 高 | 一般 |
特異性 | 較低。鎳離子暴露的配位點較多，非特異性吸附的可能性也相應(yīng)增加 | 高。鎳離子被NTA更緊密地包裹，減少了非特異性結(jié)合 | 高。減少非特異性吸附，獲得高純度蛋白 |
螯合劑耐受性 | 不耐受 | ≤1 mM EDTA | ≥10 mM EDTA |
離子泄露風(fēng)險 | 較高 | 低 | 極低 |
應(yīng)用 | 適用于對純度要求不高，或目標蛋白表達量較高的常規(guī)純化 | His標簽蛋白純化的“金標準"，適用于大多數(shù)需要高純度蛋白的場景，是應(yīng)用較廣泛的IMAC介質(zhì) | 適用于樣品中含有EDTA或DTT等干擾物質(zhì)（例如動物細胞表達），或者對蛋白純度有很高要求的純化任務(wù) |
Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF系列使用流程圖
Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF系列使用流程圖
Ni-TED瓊脂糖凝膠FF系列使用流程圖
2. His標簽蛋白純化填料參數(shù)：
類別 | Ni-IDA瓊脂糖凝膠FF | Ni-NTA瓊脂糖凝膠FF | Ni-TED瓊脂糖凝膠FF |
基質(zhì) | 6%交聯(lián)瓊脂糖 | ||
配基 | 亞氨基二乙酸，~30 μmol Ni2+/mL | 次氮基三乙酸，~17 μmol Ni2+/mL | 三羧甲基乙二胺，~60 μmol Ni2+/mL |
粒徑范圍a | 45~165 μm | ||
平均粒徑 | ~90 μm | ||
動態(tài)結(jié)合載量b | ≥40 mg/mL | ≥20 mg/mL | |
推薦工作流速 | 60~300 cm/h | ||
使用 pH | 4~8.5（推薦的工作 pH），3~12（長期穩(wěn)定）；2~14（短期穩(wěn)定） | ||
化學(xué)穩(wěn)定性 | 在以下溶液中穩(wěn)定：常用的水相緩沖液、1 mol/L 氫氧化鈉、8 mol/L 尿素、6 mol/L 鹽酸胍、70%乙醇等。 | ||
注：
a：90%體積以上的微球在此粒徑范圍；
b：DBC10%測試條件為：10%流穿，大腸桿菌表達帶組氨酸標簽的重組蛋白，6min停留時間。
3. 應(yīng)用數(shù)據(jù)：
圖6：Lane M： Marker
Lane 1 ：Start material
Lane 2: Flowthrough 1
Lane 3: Flowthrough 2
Lane 4: Elution (20 mM Imidazole)
Lane 5: Elution (50 mM Imidazole)
Lane 6: Elution (100 mM Imidazole)
Lane 7: Elution (200 mM Imidazole)
Lane 8: Elution (300 mM Imidazole)
Lane 9: Elution (500 mM Imidazole)
填料： Ni-IDA 瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱）（Cat: abs91007-G），1mL
樣品：his6 -tagged recombinant Streptococcus Protein G produced in E. coli
結(jié)合緩沖液：20 mM PB, 150 mM NaCl, pH 7.4
洗脫緩沖液：20 mM PB, 150 mM NaCl, 20-500 mM Imidazole, pH 7.4
圖7：填料：Ni-NTA 瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱）（Cat: abs91008-M），1mL
樣品：his6 -tagged recombinant Streptococcus Protein G produced in E. coli
結(jié)合緩沖液：20 mM PB, 150 mM NaCl, pH 7.4
洗脫緩沖液：20 mM PB, 150 mM NaCl, 20-500 mM Imidazole, pH 7.4
其他標簽蛋白親和純化
特點 | GST瓊脂糖凝膠FF | MBP瓊脂糖凝膠FF | 生物素瓊脂糖凝膠FF | Strep II瓊脂糖凝膠FF |
填料配基 | 谷胱甘肽 | 糊精 | 鏈霉親和素 | 鏈霉親和素突變體 |
作用的標簽 | GST (Glutathione S-transferase)，~26 kDa | MBP (Maltose-Binding Protein)，~42 kDa的蛋白 | 生物素標記（通過生物素連接酶（BirA）定點連接到目標蛋白的特定序列（如AviTag）上，也可以通過化學(xué)方法非特異性連接 | Strep II，8個氨基酸組成的短肽 (WSHPQFEK) |
純化原理 | GST標簽?zāi)芘c固定化在介質(zhì)上的谷胱甘肽發(fā)生特異性、可逆的結(jié)合 | MBP標簽?zāi)軌蛱禺愋缘刈R別并結(jié)合介質(zhì)上的糊精 | 生物素與鏈霉親和素之間存在自然界中較強的非共價相互作用之一 | Strep II標簽?zāi)軌蚺c鏈霉親和素突變體的生物素結(jié)合口袋發(fā)生高親和力、高特異性的可逆結(jié)合 |
洗脫方法 | 使用還原型谷胱甘肽（Reduced Glutathione）進行競爭性洗 | 使用高濃度的麥芽糖（Maltose）溶液進行競爭性洗脫 | 變性洗脫 | 使用D-生物素（D-biotin）溶液進行競爭性洗脫 |
GST瓊脂糖凝膠FF應(yīng)用：
Lane M： Marker
Lane 1： Start material
Lane 2: Flowthrough
Lane 3: Elution
填料：GST瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱）（Cat: abs91010-G），1mL
樣品: GST-SUMO produced in E. coli
結(jié)合緩沖液: 20 mM PB, 150 mM NaCl, pH 7.4
洗脫緩沖液: 20 mM PB, 150 mM NaCl, 10 mM glutathione, pH 7.4
MBP瓊脂糖凝膠FF應(yīng)用：
Lane M： Marker
Lane 1： Start material
Lane 2: Flowthrough
Lane 3: Elution
填料：MBP瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱）（Cat: abs91011-G），1mL
樣品: MBP produced in E. coli
結(jié)合緩沖液: 20 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, pH7.4
洗脫緩沖液: 20 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, 10 mM D-maltose, pH7.4
Lane M： Marker
Lane 1： Start material
Lane 2: Flowthrough
Lane 3: Elution
填料：Strep II瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱）（Cat: abs91013-G），1mL
樣品: Strep II-tagged EGF produced in E. coli
結(jié)合緩沖液：20 mM Tris-HCl, 500 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH 8.0
洗脫緩沖液：20 mM Tris-HCl, 500 mM NaCl, 1 mM EDTA, 10mM D-Biotin, pH 8.0
4. 愛必信標簽蛋白純化填料產(chǎn)品信息
實驗操作視頻請點擊：
商品貨號 | 商品名稱 |
abs91008-G | Ni-NTA 瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱） |
abs91008-M | Ni-NTA 瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱） |
abs91008-F | Ni-NTA 瓊脂糖凝膠FF |
abs91007-G | Ni-IDA 瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱） |
abs91007-M | Ni-IDA 瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱） |
abs91007-F | Ni-IDA 瓊脂糖凝膠FF |
abs91009-F | Ni-TED 瓊脂糖凝膠FF |
abs91009-G | Ni-TED 瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱） |
abs91009-M | Ni-TED 瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱） |
abs91010-F | GST瓊脂糖凝膠FF |
abs91010-G | GST瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱） |
abs91010-M | GST瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱） |
abs91011-F | MBP瓊脂糖凝膠FF |
abs91011-G | MBP瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱） |
abs91011-M | MBP瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱） |
abs91012-F | 生物素瓊脂糖凝膠FF |
abs91012-G | 生物素瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱） |
abs91012-M | 生物素瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱） |
abs91013-F | Strep II瓊脂糖凝膠FF |
abs91013-G | Strep II瓊脂糖凝膠FF（重力預(yù)裝柱） |
abs91013-M | Strep II瓊脂糖凝膠FF（中壓預(yù)裝柱） |
好消息！Absin文獻獎勵重磅升級！
Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
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