一、PHA-P 與 PHA-L、PHA-M 在定義上如何區(qū)分?
PHA 均由紅腰豆提取,為 L(促分裂 / 白細(xì)胞凝集)、E(紅細(xì)胞凝集)亞基組成的四聚體糖蛋白,含 5 種亞型組合。愛必信貨號(hào) abs47039025 對(duì)應(yīng)的 PHA-P 是純化分離前的原生蛋白粗提物,同時(shí)完整包含 PHA-L 與 PHA-E 兩種組分、全部五種異構(gòu)體;PHA-L 經(jīng)色譜純化僅含 L?,紅細(xì)胞凝集活性極低;PHA-M 為粘蛋白構(gòu)型粗提物,雖組分相近但蛋白理化形態(tài)和 PHA-P 存在差異。該產(chǎn)品為 500× 無菌澄清溶液,原液濃度 1.25mg/mL,-20℃避光保存,有效期 2 年。
PHA-M、PHA-L、PHA-P組分結(jié)構(gòu)對(duì)比:
PHA-M(粘蛋白粗提):全亞型混合
PHA-L(L4純化型):僅L亞基
PHA-P普通粗提:L+E混合型
二、PHA-P 的核心生物學(xué)應(yīng)用包含哪些?
PHA-P 兼具促淋巴細(xì)胞分裂與紅細(xì)胞雙重凝集活性,屬于廣譜非特異性絲裂原。其一,體外刺激人 / 小鼠 PBMC 增殖,誘導(dǎo) IFN-γ、白介素等細(xì)胞因子釋放,上調(diào)淋巴細(xì)胞膜表面標(biāo)志物;其二,依靠紅細(xì)胞凝集活性,開展血凝梯度試驗(yàn)與血型相關(guān)定性檢測(cè);其三,作為體外免疫模型刺激劑,用于免疫功能基礎(chǔ)探究。原液為500 倍濃縮,實(shí)驗(yàn)常用梯度稀釋法摸索終濃度。
PHA-P作用通路與應(yīng)用方向:結(jié)合血細(xì)胞表面糖鏈,實(shí)現(xiàn)T細(xì)胞增殖活化、細(xì)胞因子分泌;可應(yīng)用于紅細(xì)胞凝集梯度試驗(yàn)、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)、免疫表型分析實(shí)驗(yàn)。
三、哪些科研實(shí)驗(yàn)優(yōu)先選用 PHA-P 試劑?
1. 96 孔紅細(xì)胞凝集梯度試驗(yàn):采用倍比稀釋方案,50μL 試劑梯度加樣后加入 A 型紅細(xì)胞懸液,肉眼判定凝集效價(jià),是 PHA-P 標(biāo)志性應(yīng)用實(shí)驗(yàn);
2. 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn):CCK8、3H 摻入法檢測(cè) PBMC 增殖,評(píng)價(jià)機(jī)體細(xì)胞免疫水平;
3. 體外細(xì)胞因子與膜蛋白研究:體外活化淋巴細(xì)胞,借助 ELISA、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞因子與 CD69、CD25 等活化標(biāo)志物。
實(shí)操要點(diǎn):試劑收貨后無菌分裝,減少反復(fù)凍融;產(chǎn)品質(zhì)控依靠小鼠脾細(xì)胞增殖驗(yàn)證活性。
PHA-P經(jīng)典實(shí)驗(yàn)操作流程:
血凝梯度實(shí)驗(yàn):1.96孔倍比稀釋試劑 2.添加紅細(xì)胞懸液 3.觀測(cè)凝集結(jié)果
淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn):1.PBMC分離鋪板 2.PHA-P刺激培養(yǎng) 3.細(xì)胞增殖檢測(cè)
膜蛋白/因子檢測(cè):1.淋巴細(xì)胞體外活化 2.收集細(xì)胞與上清 3.流式/ELISA測(cè)定
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