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| 品牌 | absin | CAS | - |
|---|---|---|---|
| 分子式 | - | 純度 | - |
| 分子量 | - | 貨號 | abs60371 |
| 規格 | 100T | 供貨周期 | 現貨 |
| 主要用途 | 是一系列經過基因工程重組的快速限制性內切酶,適用于質粒 DNA、PCR 產物或基 | 應用領域 | 化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥,綜合 |
快速內切酶SfiI
| 產品描述 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 描述 | SfiI 快速內切酶是一系列經過基因工程重組的快速限制性內切酶，適用于質粒 DNA、PCR 產物或基因組 DNA 等的快速酶切。所有快速內切酶在通用的 CutOne 或 CutOne ColorBuffer 中都具有優良的活性，能夠在 5~15 分鐘內完成酶切。此外，去磷酸化、連接試劑在 CutOne Buffer 中均具有 100% 活性，支持一管化反應，提升“酶切 - 修飾 - 連接"的體驗。CutOne Color Buffer 包括紅色和黃色示蹤染料，可將產物直接用于凝膠電泳。CutOne Color Buffer 的紅色染料與 2500 bp 雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近；黃色染料與 10 bp雙鏈 DNA 片段在 1% 瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。 建議反應條件：
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| 活性 | 10U/μL | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 使用方法 | 使用方法 1、DNA 快速酶切流程 （1）在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系：
a. 本體系適用于經過純化的 PCR 產物酶切。未純化的 PCR 產物具備一定的離子強度，10× Cutone Buffer 加入量可適當減少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同時具有外切酶活性，會影響酶切產物，因此如下一步需進行（2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴； （3）50℃溫育 15 min（質粒），或 15~30 min（PCR 產物），或 30~60 min（基因組 DNA）； （4）酚氯仿抽提或柱純化（可選）； （5） 如果使用 CutOne Color Buffer 進行酶切反應，得到的產物可以直接進行上樣電泳。 2、雙酶切或多酶切 （1）每種快速內切酶的用量為 1 μl，并根據需要適當擴大反應體系； （2） 所有快速內切酶的體積總和不得超過總反應體系的 1/10； （3）如果所用的幾種快速內切酶的最適反應溫度不同，應先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，在其最適反應溫度下進行酶切反應。 3、適用于質粒的擴大反應體系
甲基化修飾影響
在不同反應緩沖液中的活性
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| 技術指標 | 質量控制： 功能活性檢測： 50℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反應體系中，1 μl SfiI 能夠在 15 min 內完quan消化 1 μg pEPE DNA。 超長時間溫育檢測： 50℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反應體系中，將 1 μl SfiI 與 1 μg pEPE DNA 共同溫育 3 h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解。更長時間酶切可能出現星號活性。 酶切 - 連接 - 再酶切檢測： 50℃下，使用 10 倍酶量的 SfiI 消化 DNA 底物，回收酶切產物，在 22℃下使用 T4 DNA Ligase (Fast) 可以將超過 95%的酶切產物重新連接。將連接產物再次回收后，使用相同的內切酶可以重新切開 95% 以上的連接產物。 非特異性內切酶活性檢測： 50℃下，在 20 μl 通用 CutOne 反應體系中將 1 μl SfiI 與 1 μg 超螺旋質粒 DNA 共同溫育 4 h 后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，少于 10% 的質粒 DNA 轉變成缺刻或線性狀態。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 儲存/保存方法 | -20°C 及以下運輸及保存，長期保存建議放-80°C 。有效期2年。 |
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