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過去十年，靶向蛋白降解（TPD）從實驗室寵兒躍升為千億級產業，Cereblon（CRBN）作為較常用的 E3 酶之一，其配體親和力數據直接決定 PROTAC 分子的活性窗口。然而，一個被忽視的技術細節——示蹤劑（tracer）的標記方式——正悄悄拉大我們與真實客觀數值的距離。
進口R品牌的高通量CRBN Binding Kit 用“沙利度胺-熒光蛋白"作為示蹤劑，在行業內先建立了高通量篩選范式，這一方案如今被我們重新拆解、驗證、升級。它不是簡單的“國產替代"，而是對實驗失真問題的系統性修復，讓IC50更加接近客觀真值。
失真源頭：當 105 kDa 的 APC 蛋白騎在 0.25 kDa 的沙利度胺頭上
XL665作為第一代acceptor，是改良過的別藻藍蛋白（APC），將 APC的亞基偶聯，增加了穩定性，位于紅外光區，激發波長 620nm，發射波長665nm，進一步降低了生物溶液對實驗的影響（生物學成分很少在紅外光區有自發熒光），XL665作為acceptor在CRBN Binding中使用，分子量約為105 kDa，但是與沙利度胺偶聯后，對體系有以下影響：
空間位阻：
? APC/XL665 的直徑≈6nm，相當于沙利度胺長度的 10 倍，在 CRBN 淺口袋入口形成“熒光墻"；
? 大分子熒光標記會在 CRBN 淺口袋入口處產生空間位阻，導致表觀 K_d 被系統性高估 1.5–4 倍。
擴散速率：
? 蛋白示蹤劑整體分子量高，擴散系數 D 下降 ；
? 小分子候選物（< 0.5 kDa）擴散系數遠高于kit中標記后的沙利度胺，競爭環境失衡。
結果失真：
? 以上這些影響因素導致IC50數值與結果存在偏差，影響候選物的選擇
技術破局：把小分子還給小分子
用分子量小于1kDa的小分子熒光團直接標記沙利度胺，從物理層面消除兩大失真因子，競爭動力學回到“小分子對小分子"的公平賽道，讓每一次 IC50都經得起臨床拷問。
數據說話
（1）標準曲線
由圖表可知，由于Thalidomide標準品與Thalidomide-Ac競爭與CRBN/DDB1的結合，使信號值降低。
（2）結合活性和抑制劑驗證*
Thalidomide-Ac與CRBN/DDB1結合驗證，由結果可知，蛋白濃度不變時，檢測信號隨著Thalidomide-Ac濃度的升高而增加。Lenalidomide和Pomalidomide以及PROTAC BET Degrader-1可以競爭Thalidomide-Ac與CRBN/DDB1的結合。
*數據僅做示例參考
不止于 CRBN，更有 PROTAC的“一站式解決方案"
? 基于TR-FRET的三元復合物篩選
| 標曲 | 貨號 | 商品名 |
| abs560016 | Human BRD4/CRBN PROTAC Binding Kit |
| abs560042 | Human BCL-XL/CRBN PROTAC Binding Kit |
| abs560044 | Human BCL-XL/VHL PROTAC Binding Kit |
| abs560012 | Human DDB1-CRBN&GSPT1 Binding Kit |
| abs560054 | HumanVAV1/CRBN PROTAC Binding Kit |
? PROTAC藥靶蛋白
靶點縮寫 | 主要針對疾病 | PROTAC | Absin | UA |
AR（雄激素受體） | 前列腺癌 | ARV-110 |
| UA080416 |
BCL6 | 淋巴瘤 |
|
| UA080266 |
Bcl-X(L) | 淋巴瘤 |
| abs06285 |
|
B-rafV600E | 惡性黑色素瘤 |
|
| UA080261 |
BRD4 | 多種癌癥 |
|
| UA080277 |
BRD9 | 多種癌癥 |
|
|
|
BTK | 慢性淋巴細胞白血病 | NX-2127 |
| UA080041 |
EGFR | 非小細胞肺癌 |
| abs05321 |
|
ER（雌激素受體） | 乳腺癌 | ARV-471 | abs04404 |
|
IRAK4 | 自身免疫性疾病 |
|
| UA080294 |
KRASG12D | 實體瘤 | ASP-3082 |
| UA010733 |
MDM2 | 多種癌癥 | MD-224 | abs06561 |
|
NTRK | 實體瘤 |
| abs05487 |
|
STAT3 | 復發或難治性淋巴瘤 | KT-333 |
| UA080435 |
? PROTAC分子——陽性對照
貨號 | 商品名 | 靶點 |
abs820796 | (S,R,S)-AHPC hydrochloride | E3 ligase VHL |
abs828204 | ACBI1 | SMARCA4:11 nM, SMARCA2:6 nM, PBRM1:32 nM |
abs828800 | AR Antagonist 1 | Androgen Receptor: |
abs825142 | ARD-2128 | VCaP:4 nM (IC50), LNCaP:5 μM (IC50) |
abs821542 | BETd-260 | BRD4PROTAC |
abs828404 | BSJ-4-116 | CDK12:6 nM |
abs819411 | dBET1 | BRD4 |
abs826439 | Dbet57 | BRD4 (BD1):500 nM (DC50) |
abs825346 | dBRD9 | ligand that recruits the cereblon E3 ubiquitin ligase:104 nM |
abs821654 | dTRIM24 | TRIM24. |
abs824454 | LC-2 | KRAS(G12C):0.25-0.76 μM (DC50) |
abs819853 | MD-224 | MDM2 |
abs826178 | MS4078 | EML4-ALK:59 nM(DC50; NPM-ALK:11 nM(DC50);ALK:33 nM |
abs828684 | MT-802 | BTK:1 nM(DC50) |
abs821197 | MZ 1 | BRD4 |
abs821447 | MZP-54 | Brd4BD2 |
abs820470 | PROTAC ERRα Ligand 1 | IC50s of 0.04 and 2.8 μM for ERRα and ERRγ |
abs828072 | PROTAC ERRα Ligand 2 | ERRα:5.67 nM |
abs821731 | TD-106 | CRBN |
abs823151 | THAL-SNS-032 | CDK9 |
abs826853 | UNC6852 | EED:247 nM |
abs818009 | VH-298 | VHL:HIF-α |
abs826121 | YX-2-107 | CDK6:4.4 nM |
abs827426 | ZEN-3219 | BRD4BD1:0.48 μM, BRD4 BD2:0.16 μM |
? PROTAC靶點相關抗體
靶點 | 貨號 | 品名 |
Ubiquitin | abs155938 | Mouse anti-Ubiquitin Monoclonal Antibody |
AR | abs145396 | Rabbit anti-Androgen Receptor mAb (JRMR-244) |
BCL6 | abs145233 | Rabbit anti-BCL6 Monoclonal Antibody(JRMR-56) |
Bcl-X(L) | abs159218 | Rabbit anti-Bcl-XL Monoclonal Antibody(2D3) |
B-rafV600E | abs173916 | Rabbit anti-BRAF Recombinant mAb (S-1328-60) |
BRD4 | abs133244 | Rabbit anti-Brd4 Polyclonal Antibody |
BRD9 | abs117685 | Rabbit anti-BRD9 Polyclonal Antibody |
More...... | ||
TPD 的黃金時代已經到來，但黃金也需要準確的刻度。我們相信，真實的數據是創新最大的加速器。當示蹤劑的分子量回到小于1kDa，我們不僅修復了一個實驗參數，更為整個行業節省了大量時間、資本與試錯的生命。
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