一、MitoSOX Red 的核心特性是什么?
該探針可自由穿透細(xì)胞膜,進(jìn)入細(xì)胞后定向富集于線粒體內(nèi)部。它僅對(duì)超氧化物產(chǎn)生氧化反應(yīng),不受其他活性氧、活性氮干擾。氧化后的探針會(huì)結(jié)合線粒體與細(xì)胞核內(nèi)核酸,釋放穩(wěn)定的紅色熒光。其熒光檢測(cè)存在兩組激發(fā) / 發(fā)射參數(shù),396 nm/610 nm 激發(fā)模式對(duì)線粒體超氧化物檢測(cè)選擇性更強(qiáng),也可采用 510 nm 激發(fā)進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)。試劑以 5 mM DMSO 儲(chǔ)備液形式儲(chǔ)存,-80 ℃可保存 6 個(gè)月,-20 ℃建議 1 個(gè)月內(nèi)使用,工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用。
二、MitoSOX Red主要適用于哪些研究場(chǎng)景?
MitoSOX Red 核心用途為定量與定位檢測(cè)線粒體超氧化物,是氧化應(yīng)激研究的核心試劑?;跓晒庑盘?hào)強(qiáng)度,可直觀反映線粒體活性氧水平,評(píng)估線粒體功能狀態(tài)。憑借高特異性,它可區(qū)分超氧化物與其他氧化物質(zhì),規(guī)避檢測(cè)干擾,適用于活細(xì)胞動(dòng)態(tài)觀測(cè)與定量分析兩類實(shí)驗(yàn)方向。
氧化應(yīng)激研究、線粒體功能分析
核心用途:檢測(cè)線粒體超氧陰離子水平、評(píng)估線粒體膜電位與呼吸鏈活性
三、常規(guī)實(shí)驗(yàn)如何使用MitoSOX Red?
1、制備MitoSOX Red染色液
(1)本品以5mM DMSO儲(chǔ)備液的形式提供。建議在開(kāi)始使用前離心產(chǎn)品,可等分試樣后用氮?dú)馓畛涔苤?,并?20°C或-80°C的避光下儲(chǔ)存。
(2)染料工作液:用合適的緩沖液(如無(wú)血清培養(yǎng)基或PBS)稀釋儲(chǔ)備液,制備濃度為1-10μM的MitoSOX Red工作液。
注:請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整優(yōu)化工作液濃度,現(xiàn)用現(xiàn)配。
2、顯微鏡檢測(cè)
MitoSOX Red的最大激發(fā)/發(fā)射光為396/610nm。MitoSOX Red 染料也可以在 510nm 處激發(fā)。如果 MitoSOX Red 染料在 396nm 而不是 510nm 處激發(fā),則該染料可能對(duì)標(biāo)記線粒體超氧化物更具選擇性。
該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高,適配多數(shù)細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)。
MitosoX Red → 稀釋配液 → 細(xì)胞染色 → 熒光檢測(cè) → 數(shù)據(jù)分析
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