一、產品簡介

動物體內發光，一般是將螢火蟲熒光素酶基因穩定整合至靶細胞染色體DNA，構建持續表達熒光素酶的細胞株。當細胞增殖、遷移或分化時，熒光素酶同步穩定表達。將穩定表達熒光素酶的細胞導入研究動物如大/小鼠體內，之后注射底物熒光素（luciferin），通過生物發光成像技術（BLI）來檢測光強度變化，從而實時監測疾病發展狀態或藥物的治療功效等。

D-熒光素鉀鹽（D-Luciferin Potassium Salt）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，其在540-600nm波長范圍內發藍綠光。其作用機制是在有氧環境下，熒光素在熒光素酶和Mg2⁺的催化作用下與ATP發生反應，生成熒光素-AMP復合體并釋放出焦磷酸(PPi)。隨后，熒光素-AMP復合體在O₂的作用下進一步生成氧化熒光素，同時釋放出CO₂和H₂O。在這個過程中，激發態的氧化熒光素返回到基態時會發出光子。熒光素所發的光更容易透過組織，在體內代謝較慢，而且特異性好。所以大部分活體成像實驗采用螢火蟲熒光素酶基因作為報告基因。

二、產品應用場景

1、體外生物發光檢測

（1）D-熒光素鉀鹽體外實驗應用場景

報告基因檢測：D-熒光素鉀鹽作為底物，用于基于熒光素酶（Luc）的報告基因檢測。通過Luc催化其反應產生的生物發光強度，可定量反映與其融合的目標基因的表達水平；

高通量藥物篩選：將熒光素酶基因（Luc）作為報告基因與目標基因融合表達，通過檢測其生物發光強度，可快速篩選調控目標基因表達的化合物；

ATP含量檢測：D-熒光素鉀鹽通過ATP依賴的熒光素酶反應，將細胞內ATP水平轉化為生物發光信號，實現高靈敏度檢測，可直接反映細胞代謝狀態；

樣品污染檢測：ATP-熒光素酶生物傳感系統通過檢測活體生物共有的ATP信號，實現生物污染的高敏實時判定。

（2）體外D-熒光素鉀鹽使用方法

①用無菌蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成30 mg/mL的儲存液 (100-200×) ，混勻。立即使用，或分裝于-80℃避光保存（僅限凍融1次），避免反復凍融；

②用預熱好的培養基將儲存液稀釋至0.15-0.3 mg/mL的工作液濃度（工作液推薦現配現用）；

③去除細胞培養基；

④待圖像分析前，向細胞培養板內添加D-熒光素鉀鹽工作液，37℃ 孵育5-10 min，然后進行圖像分析。

2、體內活體成像

一個完整的生物發光活體成像過程包括構建熒光素酶重組質粒、細胞轉染和篩選、熒光素酶活性鑒定陽性克隆，再將陽性克隆細胞移植到體內建立動物模型，進而通過小動物活體成像系統檢測動物體內特定部位發出的熒光信號。

（1）體內D-熒光素鉀鹽使用方法

①用無菌的DPBS（abs970，w/o Mg2+、Ca2+）配制30 mg/mL的熒光素的儲存液，混勻。

②用0.2 µm濾膜（abs7298）過濾除菌。立即使用，或分裝于-80℃避光保存（僅限凍融1次），避免反復凍融。使用時 4℃融化，實驗前平衡至室溫（避光）。 

③腹腔注射（i.p.），按照150 mg/kg的熒光素/體重濃度進行注射（現配現用）。

④注射入體內10-15 min（待光信號達到較強穩定平臺期）后進行成像分析。

注意：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線，從而確定最高信號檢測時間和信號平臺期。

（2）體內活體成像驗證數據

Absin國產D-熒光素鉀鹽與某進口品牌發光強度對比，無顯著性差異。

三、常見問題解答

1、熒光素酶底物有哪些，如何選擇？

D-熒光素、D-熒光素鉀鹽和D-熒光素鈉鹽是常見的熒光素酶底物，主要區別在于溶解和分散性能。D-熒光素鉀鹽在水和緩沖液中的溶解度高，且溶解速度較快，故在一般的生物學試驗中常用D-熒光素鉀鹽。

2、D-熒光素鉀鹽如何保存？

（1）D-熒光素鉀鹽優先推薦于-80 ℃（若實驗室無-80℃冰箱，可使用-20℃）避光儲存，有效期12個月；

（2）復溶后的儲備液推薦分裝避光凍存于-80 ℃（僅限凍融1次），避免反復凍融，盡量在3個月內使用；

（3）工作液推薦現配現用。

3、體外細胞實驗需要對細胞進行裂解嗎？

D-熒光素鉀鹽體外細胞實驗通常無需裂解，因其水溶性和脂溶性良好，可自然穿透細胞膜，直接在活細胞內與熒光素酶反應發光。但若需定量檢測熒光素酶活性（如報告基因分析）或ATP水平，則需裂解細胞以釋放酶，再與底物反應，通過發光強度定量酶/ATP含量。

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